李海霞
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黄海波
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刘鹏
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黄松
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张桂芳
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张丹雁
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张建霞
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陈念
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赖小平
摘要:
目的:测定和分析不同产地野生铁皮石斛样品的rDNA ITS序列,探讨利用ITS序列推测铁皮石斛样品产地来源的可行性。方法:提取总基因组DNA,使用通用引物ITS5F/ITS4R 进行PCR 扩增,产物经电泳检测、纯化和测序后用Sequin 11.0提交GenBank。用Bioedit 7.0中的Clustal W 对GenBank中包括本研究提交的11条在内的所有33条铁皮石斛的ITS 序列进行多重序列比对,随后以金钗石斛和密花石豆兰为外群,用邻接法构建NJ 系统发育树。结果:从所有测定的ITS序列中选择11条提交GenBank,获得登录号JF803235~JF803245。所有铁皮石斛经比对后共发现645 个同源位点,9个信息位点(ITS1 区3个,5.8 S 区4个,ITS2 区2个)。系统发育分析发现,金钗石斛和密花石豆兰位于树的基部,另外32条铁皮石斛共同形成单个大的分支,未发现产地来源与系统树的拓扑结构之间存在对应关系。结论:由于缺乏完善的铁皮石斛标准品及其DNA 参考序列的提交标准,同时单个ITS序列仅能提供有限的系统发育信息位点,因此通过ITS 序列分析的方法推测铁皮石斛样品的产地来源目前尚不具有可行性。