2021, 23(3):938-947.
DOI: 10.11842/wst.20200718003
摘要:
目的 观察阴虚证对糖尿病肾病（Diabetic kidney disease，DKD）大鼠肾损害以及自噬变化的影响，探讨DKD阴虚证大鼠肾脏病理损害与自噬之间的关系。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，随机分为正常组、糖尿病组。12周后将糖尿病组中尿蛋白阳性的大鼠随机均分为DKD组、阴虚组，阴虚组大鼠通过左甲状腺素钠片灌胃法制备DKD阴虚证模型。每日观察大鼠一般情况。第16周处死取材，观察大鼠血肌酐（Serum creatinine，Scr）、血尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、24 h尿蛋白定量（24-hour urinary protein，24 h Pro）、肾脏病理改变；ELISA法检测阴虚证指标-血清环磷酸腺苷（Cyclic adenosine monophosphate，cAMP）、环磷酸鸟苷（Cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）及血清游离甲状腺素（Free Thyroxine 4，fT4）、血清皮质醇（Cortisol，Cort）、雌二醇（Estradiol，E2）；透射电镜观察大鼠肾脏超微结构及自噬变化；免疫组化、Western Blot、RT-PCR法检测肾组织纤维化指标纤连蛋白（Fibronectin，FN）、平滑肌肌动蛋白（Alpha smooth muscle actin，α-SMA）、自噬相关Beclin-1、LC3-II、P62的蛋白及其mRNA表达。结果 与正常组比较，DKD组出现精神萎靡、多饮多食多尿、毛发粗糙等症状，阴虚客观指标血清fT4、Cort、E2、cAMP、cAMP/cGMP比值升高、cGMP下降（P < 0.01或P < 0.05），24 h Pro、Scr、BUN升高（P < 0.01），光镜及电镜下肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达均增高（P < 0.05或P < 0.01），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达均下降（P < 0.05或P < 0.01）；与DKD组相比，阴虚组大鼠死亡率增加，出现急躁易怒、饮食饮水量增加、毛发粗糙无光泽、体质量下降等现象，血清fT4、Cort、E2、cAMP、cAMP/cGMP比值（P < 0.05或P < 0.01），24 h Pro、Scr、BUN进一步升高（P < 0.01或P < 0.05），cGMP则下降（P < 0.01），同时肾脏病理损伤加重，肾组织FN、α-SMA、P62的蛋白及mRNA表达进一步增高（P < 0.01或P < 0.05），LC3-II、Beclin-1的蛋白及mRNA表达则下降（P < 0.01或P < 0.05）。结论 在病证结合模型下，阴虚证能够加重糖尿病肾病大鼠肾脏病理损伤，可能与抑制肾脏组织的自噬功能有关。
